本[發明專利]公開了一種分離與原代培養胎盤壁蛻膜間充質干細胞的方法,其包括以下步驟:1)分離及前處理:將取到的胎盤樣品浸泡消毒液30s,清洗數次至液體不再呈血紅色,剝離羊膜,分離壁蛻膜組織,用PBS清洗后剪碎;2)消化:I型膠原酶消化2h,加入完全培養基終止消化,得到細胞混懸液;3)原代培養:將細胞懸浮液倒入200目濾網過濾,收集濾液1200rpm離心5min,棄上清,下層細胞經無血清培養基反復吹打混勻至散開后接種到明膠包被的培養皿中,以37℃、5%CO2濃度的環境條件下培養。本[發明專利]并且通過調整消化液的選用和原代培養中的工藝參數,從而獲得比胎盤間充質干細胞活性更好,純化程度更高的胎盤壁蛻膜間充質干細胞。