本發明公開了一種表達IBV的S1和N雙抗原蛋白重組質粒及其構建方法和應用,發明人根據GenBank中注冊的雞傳染性支氣管炎病毒S1、N和Ub基因序列設計引物,通過PCR擴增雞傳染性支氣管炎病毒中國分離株GX?YL5株的S1、N和雞的Ub基因,并用分子生物學方法將雞傳染性支氣管炎病毒中國分離株GX?YL5株N和S1基因與雞Ub基因插入真核表達載體pVAX1中,構建了表達N和S1基因與雞Ub基因共表達質粒,研制了DNA疫苗pVAX1?Ub?linker?N?S1。實驗證明,該疫苗預防IBV療效顯著。應用本發明可同時將IBV的S1、N和雞Ub基因串聯插入pVAX1載體,用于預防雞傳染性支氣管炎。