本[發明專利]提供了一種新型鴨呼腸孤病毒L組基因的克隆方法,包括步驟:1)以Trizol試劑提取新型鴨呼腸孤病毒尿囊液的總RNA;2)采用PrimeScriptTM One Step RT?PCR Kit試劑盒對步驟1)提取的總RNA進行克隆,其中使用的特異性引物包括L1引物對、L2引物對和L3引物對中的任意一對,所述L1引物對包括L1?F引物和L1?R引物,所述L2引物對包括L2?F引物和L2?R引物,所述L3引物對包括L3?F引物和L3?R引物。本[發明專利]的有益效果是:建立一步法擴增NDRV的L組全長基因序列的RT?PCR體系,避免了常規PCR擴增后還需對基因片段克隆、連接、多次測序等增加繁雜工作。全長的擴增,亦為NDRV L組編碼的蛋白研究奠定基礎。