本[發明專利]提供了一種分離與原代培養犬胎盤來源的間充質干細胞的方法,包括:1)犬胎盤保存液的配制;2)新生犬臍帶的采集;3)從產后廢棄組織中分離出胎盤組織;4)清洗和剪碎組織塊;5)胰蛋白酶消化;6)分離除去紅細胞;7)擴增培養。本培養方法操作簡單、重復性好,從中可獲得較少的雜細胞和無污染的純凈間充質干細胞。培養方法中使用的胎盤保存液能避免胎盤運輸過程中細菌的大量增長,為后期成功分離胎盤間充質干細胞提供基礎,胰蛋白酶消化方法快速便捷,單細胞產量高且能較好保持細胞活性,最后用Ficoll分離法除去紅細胞,能獲得較純的具有較強增殖能力的間充質干細胞,可用于后續該細胞的建系、干細胞特性與治療疾病等。