[00081953]長期傳代培養雞胚胎干細胞的方法及其專用培養基
技術詳細介紹
長期傳代培養雞胚胎干細胞的方法及其專用培養基，其特征在于分離期胚盤明區的細胞，經機械吹打分散成單個細胞或小細胞團后，接種于STO飼養層，用上述雞胚胎干細胞在專用培養基及37~38℃環境下培養，3~5天傳代一次，專用培養基包括條件培養液600-900mL；胎牛血清50-150mL；雞血清5-20mL；非必需氨基酸中的一種或幾種混合物5-25mL；L-谷氨酰胺0.146-0.292g；β-巰基乙醇6-14μL；小鼠白血病抑制因子1—2×106IU；堿性成纖維細胞生長因子10-50μg；干細胞生長因子5-20μg，將上述成分用DMEM高糖培養基定容至1000mL，調pH值為7.2-7.5，條件培養液是這樣獲得的，培養BRL-3A細胞至細胞匯合后，收集培養細胞的上清液，離心分離后再經濾膜過濾所得即為條件培養液。本[發明專利]與已有技術相比，具有可以實現雞胚胎干細胞的長期傳代培養，并具有細胞增殖快、克隆獲得率高的優點。
