本發明提供了一種基于色差對比的土霉素檢測試紙、使用方法及制備方法,屬于環境分析領域。該土霉素檢測試紙包括結合區、顯色區和吸水區,依次排布,以PVC膠板為底襯;試紙一端的結合區粘貼含有土霉素適配子的玻璃纖維素膜,試紙中間的顯色區粘貼含有石墨烯/納米鉑的硝酸纖維素膜,試紙另一端的吸水區粘貼吸水紙,中間顯色區的硝酸纖維素膜分別與結合區的玻璃纖維素膜和吸水區的吸水紙間有重疊;使用過程中,同時對標準水樣與待測水樣進行測定,通過對比試紙顯色區顏色的差異,判斷待測水樣中土霉素含量是否超標。本發明具有制備簡單,使用方便,性能穩定等優點,適用于水環境中土霉素的快速檢測。