本發明提供一種負載維生素C的絲素蛋白/透明質酸復合納米纖維的制備方法,其具體操作步驟如下:將絲素蛋白溶于去離子水中,室溫下充分攪拌至完全溶解,得到質量百分比為30-35%的絲素蛋白溶液;將透明質酸溶于去離子水中,室溫下充分攪拌至完全溶解,得到質量百分比為2-4%的透明質酸溶液;將絲素蛋白溶液和透明質酸溶液混合,得到絲素蛋白/透明質酸混合溶液;將維生素C磷酸酯鈉溶于絲素蛋白/透明質酸混合溶液中,充分攪拌均勻得到共混靜電紡絲液;將共混靜電紡絲液通過靜電紡絲,得到負載維生素C的絲素蛋白/透明質酸復合納米纖維。該方法制備出的納米纖維能在組成上模擬細胞外基質的成分,賦予納米纖維優異的生理功能。