[00051762]一種離體高效構建多拷貝解脂耶氏酵母表達載體及其應用方法
聯系人： 湖北大學
所在地： 湖北武漢市
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技術詳細介紹
摘要：本發明提出一種離體高效構建多拷貝解脂耶氏酵母表達載體及其應用方法，重組表達載體步驟為：設計4條引物，分別加在pINA1296載體的啟動子上游和終止子下游，分別PCR擴增包括以啟動子和終止子為區域的小片段及以載體的其他框架為區域的大片段，經回收純化后，轉化大腸桿菌XL10-Gold；驗證重組子，得用于多拷貝解脂耶氏酵母表達載體pINA1296I。應用方法為：選擇需表達的目的基因，將目的基因插入pINA1296I載體中，組成新的含有目的基因的單拷貝重組質粒pINA1296I-xxx-A1。再利用生物磚方法來實現體外串聯多拷貝目的基因，pINA1296I-xxx-A2，pINA1296I-xxx-A3，pINA1296I-xxx-A4等。本發明安全、簡單、易操作，可以提高目的蛋白的表達量。
