[00125517]miRNA調控網絡介導自然流產發生機制及補腎安胎法的干預研究

本項目受到國家自然科學基金委員會的資助（81373672）。自然流產（SA）是常見的生殖障礙,滋養細胞功能的改變是其發生的關鍵環節。①經倫理委員會答辯獲得倫理批文,簽署知情同意書,通過基因芯片測序得到蛻膜組織篩選上調93個miRNAs,下調34個miRNAs,經生信分析篩選上調miR-126-3p可通過介導FOXO3下調PR,miR-126-3p調控靶基因PLXNB2影響SA的發生。通過臨床組織樣本PCR、WB、HE、IHC驗證miR-126-3p、FOXO3、PR、PLXNB2、Bcl-2、Bax的表達。②細胞層面,轉染構建細胞模型和RU-486誘導滋養細胞損傷模型,熒光素酶檢測首次明確miRNA-126-3p能下調PLXNB2的表達,并通過影響滋養細胞的侵襲和遷移功能增加SA發生;購置藥材并行基原鑒定,提取補腎安胎復方減味壽胎丸（JWSTW）和有效組分菟絲子總黃酮,并進行HPLC質量控制,干預后PLXNB2表達上升,同時挽救滋養細胞的遷移和侵襲功能,從而達到治療作用;首次通過CHIP、EMSA、熒光素酶闡明了miRNA-126-3p介導FOXO3調控PR表達機制,闡釋了減味壽胎丸在SA滋養細胞中可能通過抑制miRNA-126-3p介導上調FOXO3上調PR表達的保護機制;闡明了補腎安胎有效組分川續斷皂苷VI 可促進凋亡模型狀態滋養細胞增殖,降低其凋亡率,通過激活AKT信號通路上調Bcl-2表達、下調Bax表達,并能增加PR表達,從而達到抑制凋亡。③動物模型層面,構建了CBA/J× DBA/2 小鼠流產模型和流產大鼠模型,從復方-有效組分-有效成分層次,通過計算流產率,胚胎直徑和體視鏡觀察胚胎,免疫組化、Western blot、PCR分別從宏觀臟器-組織-基因-蛋白系統闡述了味壽胎丸、菟絲子總黃酮、川續斷皂苷VI可提高模型流產率,提高激素水平及相應受體表達,可能通過提高miRNA-126-3p靶基因FOXO3、PLXNB2 PR的表達影響到SA發生而維持妊娠。本研究為SA深入機制研究提供穩定的載體,臨床驗證為早期臨床鑒別診斷提供潛在標志物。驗證補腎安胎法可通過降低miR-126-3p表達介導FOXO3上調PR的表達通過抑制滋養細胞的凋亡,通過降低miR-126-3p表達上調靶基因PLXNB2的表達促進滋養細胞的侵襲和遷移功能,從而降低SA發生的科學假說,豐富了自然流產的發生機制,為闡釋補腎安胎法內涵。 本項目培養廣東省首屆杰出青年醫學人才1名,廣東省青年珠江學者1名,首批廣東省名中醫師承項目傳承人1名,博士研究生2名,碩士研究生1名。