[00010304]一種用于重組蛋白分泌型表達的雙基因突變大腸桿菌的構
技術詳細介紹
一種用于重組蛋白分泌型表達的雙基因突變大腸桿菌的構建方法
本發明公開了一種用于重組蛋白分泌型表達的雙基因突變大腸桿菌的構建方法使用預先設計的細胞膜蛋白和細胞壁合成酶基因的雙敲除基因的引物進行PCR反應，得到兩端為10~250bp特定目標基因同源序列及中間為抗性標記序列的雙敲除基因的基因打靶片段，并分別通過電轉化整合到宿主大腸桿菌染色體中，得到雙基因突變的分泌型大腸桿菌菌株。本發明提高重組外源蛋白的表達，降低目標蛋白的胞內降解；減少重組外源蛋白的胞內積累，消除了包涵體的形成；取消了細胞破壁工藝，降低了熱原，簡化了分離純化；進而達到降低生產成本，提高蛋白表達和產品質量的目的。
